大乳粒檢測(cè)方法及各國(guó)藥典的規(guī)定

【中國(guó)藥典2010版】

  目前中國(guó)藥典對(duì)于乳劑中乳粒粒徑的檢測(cè)僅使用光散射法測(cè)試平均粒徑。 要求：平均粒徑< 0.4微米。

【中國(guó)藥典2015公式稿】

丙泊酚注射用脂肪乳：

   大乳粒照粒度和粒度分布測(cè)定法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅸ E 第三法）檢查，平均粒徑應(yīng)為0.18～0.27μm，90％累計(jì)粒徑不得過0.4μm；大于1μm的乳粒數(shù)不得過2%，并不得檢出大于3μm的乳粒。

脂肪乳注射液(C14～24)

   大乳粒粒度和粒度分布測(cè)定法（中國(guó)藥典2010版二部附錄ⅨE第三法）或照動(dòng)態(tài)光散射法檢查，體積平均粒徑或光強(qiáng)平均粒徑不得過0.50μm；另取本品，照基于單粒子光學(xué)傳感技術(shù)的光阻法測(cè)定，大于5μm的乳粒加權(quán)總體積不得過油相體積的0.05％。

中/長(zhǎng)鏈脂肪乳注射液

   大乳粒照粒度和粒度分布測(cè)定法（中國(guó)藥典2010版二部附錄ⅨE第三法）或照動(dòng)態(tài)光散射法檢查，體積平均粒徑或光強(qiáng)平均粒徑不得過0.50μm；另取本品，照基于單粒子光學(xué)傳感技術(shù)的光阻法測(cè)定，大于5μm的乳粒加權(quán)總體積不得過油相（大豆油與中鏈甘油三酸酯）體積的0.05％。

【美國(guó)藥典】< USP36 > Chapter 729

   美國(guó)藥典對(duì)于乳劑中乳粒粒徑的檢測(cè)有方法一動(dòng)態(tài)光散射法，方法二光阻法。 方法I:動(dòng)態(tài)光散射法，要求：平均粒徑0.5微米 方法II：光阻法，大于5微米的乳粒(PFAT5)體積占比0.05%。

USP729起源：

   美國(guó)曾發(fā)生過注射脂肪乳大粒子引起的醫(yī)療事故，這也是促成美國(guó)藥典委員會(huì)對(duì)大粒子關(guān)注的起因。1994年，美國(guó)FDA（美國(guó)食品藥物管理局）宣布，有兩例因注射了腸外營(yíng)養(yǎng)脂肪乳（簡(jiǎn)稱“TNP“）而引起的死亡案例，直至1996年經(jīng)過詳細(xì)的病因調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TNP營(yíng)養(yǎng)混合液中外加的有機(jī)鈣和無(wú)機(jī)磷酸（CaHPO4）顆粒粒徑過大而堵塞了人體血管，終導(dǎo)致病人死亡。（人體微血管徑: 4–9μm，細(xì)動(dòng)脈管徑：20μm。）

   經(jīng)過數(shù)據(jù)研究和佐證，Dr. DAVID F. DRISCOLL發(fā)表了數(shù)據(jù)證明了這是因?yàn)槿閯┲写嬖诖笥?微米的乳粒引起的。而且探索了如何檢測(cè)大于5微米乳粒（英文簡(jiǎn)寫為PFAT5）的方法。

注射脂肪乳中大顆粒的危害

   1)注射脂肪乳中的大顆粒會(huì)伴隨著注射過程進(jìn)入人體肺部，造成肺部形成肉芽腫；

   2)大顆粒進(jìn)入血管可以引起血管肉芽腫、靜脈炎及血栓等；

   3)大顆粒伴隨血液循環(huán)可進(jìn)入到身體的其他器官，如肝、腎等都有損害；

   4)大顆粒的存在會(huì)影響注射液本身的穩(wěn)定性。

USP729的變遷

2004年10月

   由美國(guó)藥典發(fā)布了USP<729> Vol. 30(6) ： Globule Size Distribution in Lipid Injectable Emulsions. 在的USP<729>章節(jié)里公布了注射脂肪乳的粒度測(cè)試要求。

   方法一：采用動(dòng)態(tài)光散射或者米氏散射原理測(cè)試脂肪乳平均粒徑(MDD)，規(guī)定強(qiáng)度徑 Int-Weight:

   方法二：采用光阻法(Light Obscuration)測(cè)得PFAT5值：統(tǒng)計(jì)1.8μm-50μm的脂肪乳顆粒體積在油相體積中的比例。測(cè)試時(shí)間為120s,180s,240s，其中每個(gè)時(shí)段測(cè)試三次。PFAT5值不得超過0.05%。

2007年11月

   美國(guó)藥典USP<729>30 - NF25在方法一中做了變動(dòng)，不限測(cè)試油相的濃度，平均強(qiáng)度粒徑INT-Weight MDD值小于0.5μm或者500nm。

2010年

   美國(guó)藥典USP<729>34-NF29 既USP30版改動(dòng)后，在方法二中將測(cè)試時(shí)間改為一個(gè)測(cè)試的因素，延長(zhǎng)測(cè)試時(shí)間，運(yùn)行兩次樣品，PFAT5值均不得超過0.05%。

2013年11月

   美國(guó)藥典USP<729>36-NF 基本與36版一致。

USP729的內(nèi)容

    在USP729中對(duì)注射脂肪乳中乳滴粒度分布做了明確的規(guī)定，顆粒粒度分布的兩個(gè)主要因素：顆粒平均粒徑和大顆粒尾部分布必須限制在規(guī)定的范圍內(nèi)。 檢測(cè)項(xiàng) I: 脂肪乳乳滴平均粒徑分布(動(dòng)態(tài)光散射原理) 0.5μm 檢測(cè)項(xiàng)II: 脂肪乳尾端大于5μm的乳滴（PFAT5）占油相體積比例(光阻法)0.05% 。

       右圖表示了動(dòng)態(tài)光散射法只能測(cè)出樣品的平均粒徑，但是對(duì)于“尾部”PFAT5來說，其所占的比例極低，普通的光散射方法不能檢測(cè)出，所以使用光阻法來檢測(cè)PFAT5 值。

中國(guó)乳劑行業(yè)對(duì)粒徑的關(guān)注

1.中國(guó)藥典委員會(huì)很早就對(duì)脂肪乳的大粒子進(jìn)行了研究。

2.中國(guó)仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作已經(jīng)開展，2015年會(huì)啟動(dòng)注射劑的評(píng)價(jià)工作。

3.國(guó)內(nèi)企業(yè)和藥典委員會(huì)已經(jīng)對(duì)某些品種進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高，如丙泊酚乳劑注射液。

4.藥典公式稿關(guān)于提高脂肪乳的標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)結(jié)束公示，即將進(jìn)入藥典。

常見問題與解答

       Q1、PFAT 5是計(jì)算體積還是數(shù)量比例的？

答：PFAT5——美國(guó)藥典對(duì)乳劑大顆粒尾部(Large- Diameter Tail)分布規(guī)定,指待測(cè)樣品的粒徑值(X)在5 μm＜X＜50 μm的體積占所測(cè)樣品油相體積的百分比，其數(shù)值小于0.05%屬于合格。 AccuSizer 780系列產(chǎn)品的操作軟件中有Volume Fraction calculation計(jì)算模塊，此模塊符合方法II的規(guī)范。

根據(jù)上述計(jì)算模塊中的統(tǒng)計(jì)，此樣品的PFAT5值是0.013%， 符合美國(guó)藥典要求的合格之。

Q2、PFAT 5的計(jì)算方法？

答：注射脂肪乳尾部大顆粒（Large-Diameter Tail）分布規(guī)定，其待測(cè)樣品中顆粒的粒徑 (X)在5 um＜ X ＜50 um之間的體積占所測(cè)油相總體積百分比要小于0.05%。

Q3、為什么要探究PFAT5值？

答：超過PFAT5限度值的乳劑會(huì)危害人體健康，甚至造成死亡。另外，F(xiàn)PAT5是影響脂肪乳穩(wěn)定性的一個(gè)重要指標(biāo)。

Q4、測(cè)試樣品時(shí)間的取定？

    答：經(jīng)過試驗(yàn)和數(shù)據(jù)表明，一般情況下，120秒是比較合適的測(cè)試時(shí)間。在此測(cè)試時(shí)間內(nèi)，基本上所得的數(shù)據(jù)是穩(wěn)定有效的。如果不確定，可以延長(zhǎng)測(cè)試時(shí)間（比如180秒），如果延長(zhǎng)測(cè)試時(shí)間和在120秒得出的結(jié)果一致，基本可以判定120秒是合適的檢測(cè)時(shí)間。